ACLP/AEBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403540-ACT

AEBP1 codifica a proteína 1 de ligação ao potenciador de adipócitos, também conhecida como ACLP, uma proteína associada à matriz extracelular implicada na organização do colágeno, na diferenciação de células mesenquimais e na regulação da remodelação tecidual. Em células humanas, a atividade de AEBP1 está ligada a programas de ativação de fibroblastos e à comunicação cruzada com a sinalização TGF-β/SMAD e com vias de adesão mediadas por integrinas, que coordenam a deposição de MEC e a perceção da rigidez. A expressão desregulada de AEBP1 tem sido associada a fenótipos fibróticos e à remodelação do estroma observadas em microambientes inflamatórios e no estroma associado a tumores. Estas características tornam o AEBP1 uma ferramenta molecular útil para estudar a biologia da matriz, a sinalização célula–matriz e programas transcricionais que regem a homeostase do tecido conjuntivo.

ACLP/AEBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AEBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACLP/AEBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AEBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AEBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACLP/AEBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AEBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACLP/AEBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACLP/AEBP1 em células tumorais com expressão de AEBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.