Acid Ceramidase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401495-ACT

ASAH1は酸性セラミダーゼをコードしており、これはリソソームに局在する加水分解酵素で、セラミドを脱アシル化してスフィンゴシンと遊離脂肪酸を生成します。これにより、セラミドとスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）シグナルのバランスを調節します。この酵素はスフィンゴ脂質代謝の中核を担い、膜のターンオーバー、エンドリソソームの恒常性、オートファジー、ならびに細胞生存や炎症シグナルを形作るストレス応答性経路に影響を与えます。ASAH1の活性は、セラミド依存的アポトーシスや脂質媒介性シグナル伝達を調節し、リソソーム機能をより広範な代謝適応と結び付けます。ASAH1および酸性セラミダーゼの機能異常は、リソソーム蓄積症様の病態や、神経変性およびがん関連の細胞表現型にわたって観察されるスフィンゴ脂質プロファイルの変化と関連しており、機序解明の研究ターゲットとしての有用性を支持します。

Acid Ceramidase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASAH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Acid Ceramidase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASAH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASAH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Acid Ceramidaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASAH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAcid Ceramidase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASAH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAcid Ceramidase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。