ACCα Plasmide Double Nickase (h): sc-401102-NIC

ACACA codifica per l’acetil‑CoA carbossilasi alfa (ACCα), un enzima biotina‑dipendente che catalizza la conversione, ATP‑dipendente, dell’acetil‑CoA in malonil‑CoA, la tappa impegnativa della sintesi de novo degli acidi grassi. Controllando i livelli di malonil‑CoA, ACCα coordina il flusso anabolico dei lipidi e regola indirettamente la β‑ossidazione mitocondriale degli acidi grassi attraverso l’inibizione di CPT1, collegando lo stato nutrizionale all’omeostasi energetica. L’attività di ACCα è integrata con la segnalazione di AMPK e con programmi trascrizionali responsivi ai lipidi, influenzando la biogenesi delle membrane, la formazione delle gocce lipidiche e la ripartizione dell’acetil‑CoA. Un’espressione o un’attività deregolata di ACACA è stata associata a fenotipi di malattia metabolica e a vulnerabilità dipendenti dai lipidi nel metabolismo delle cellule tumorali, sostenendone l’impiego negli studi sul riassetto metabolico e sulla lipogenesi.

ACCα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACACA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACACA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACACA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACACA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.