ACBD6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428356

Panoramica

Acbd6 codifica per acyl-CoA binding domain containing 6 (ACBD6), una proteina citosolica legante i lipidi che si associa agli esteri acil-CoA a catena lunga e aiuta a coordinare la gestione intracellulare degli acil-CoA. Agendo da “buffer” e presentando gli acidi grassi attivati agli enzimi a valle, ACBD6 è in grado di influenzare il flusso del metabolismo lipidico, il rimodellamento dei lipidi di membrana e i processi dipendenti dall’acilazione che collegano lo stato nutrizionale alla funzione cellulare. Alterazioni della disponibilità di acil-CoA possono incidere sul metabolismo mitocondriale, sulle risposte allo stress ossidativo e sulla segnalazione infiammatoria, rendendo Acbd6 rilevante per studi sulla disregolazione metabolica e sui fenotipi cellulari guidati dai lipidi. L’ACBD6 del topo rappresenta quindi un utile punto di partenza per analizzare le vie regolate dagli acil-CoA in tessuti ad alto turnover lipidico, inclusi fegato, tessuto adiposo e cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acbd6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acbd6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acbd6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACBD6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acbd6 per lo studio della segnalazione di ACBD6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acbd6 critici per la funzione di ACBD6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acbd6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACBD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACBD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acbd6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACBD6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACBD6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acbd6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acbd6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.