ACAT-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402300-ACT

ACAT1 codifica a ACAT-1, uma tiolase mitocondrial (acetil-CoA acetiltransferase 1) que catalisa a tiólise reversível do acetoacetil-CoA, conectando a utilização de corpos cetônicos ao fornecimento de acetil-CoA para o metabolismo oxidativo. Essa enzima participa do catabolismo mitocondrial de lipídios e aminoácidos e contribui para a homeostase energética ao direcionar substratos para o ciclo do TCA. Alterações na atividade da ACAT-1 têm sido associadas a erros inatos do metabolismo de corpos cetônicos e a fenótipos mais amplos de disfunção mitocondrial. Por isso, o ACAT1 é frequentemente estudado no remodelamento metabólico, nas respostas ao estresse nutricional e no crosstalk entre vias mitocondriais relevante para a neurodegeneração e a bioenergética de células cancerosas.

ACAT-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACAT-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACAT-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACAT-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACAT-1 em células tumorais com expressão de ACAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.