ACAD-11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408606-ACT

O ACAD11 humano codifica o membro 11 da família das acil-CoA desidrogenases (ACAD-11), uma enzima mitocondrial implicada no início da β-oxidação de ácidos graxos por meio da desidrogenação dependente de FAD de substratos acil-CoA específicos. Ao contribuir para o catabolismo lipídico mitocondrial, a ACAD-11 influencia o balanço energético celular, a homeostase redox e vias de sinalização lipídica que se cruzam com programas metabólicos regulados por PPAR. Alterações na expressão ou na atividade de ACAD11 são, portanto, relevantes para estudos de disfunção mitocondrial, acúmulo de lipídios e respostas ao estresse metabólico. Em contextos de pesquisa biomédica, o ACAD11 é frequentemente avaliado em cenários que relacionam a capacidade de oxidação de ácidos graxos com inflamação, neurobiologia e fenótipos associados a doenças metabólicas.

ACAD-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACAD11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACAD-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACAD11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACAD11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACAD-11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACAD11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACAD-11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACAD-11 em células tumorais com expressão de ACAD11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.