Particules Lentivirales d'Activation (h) ABP1: sc-410674-LAC

AOC1 code l’amine oxydase 1 contenant du cuivre (ABP1/DAO), une enzyme sécrétée et associée à la membrane qui catalyse la désamination oxydative des amines primaires, notamment l’histamine et les polyamines, en générant des aldéhydes, de l’ammoniac et du peroxyde d’hydrogène. En régulant le renouvellement des amines biogènes et la production d’espèces réactives de l’oxygène, AOC1 influence la signalisation inflammatoire, la fonction de barrière épithéliale et l’homéostasie rédox cellulaire. L’activité d’ABP1 recoupe des voies liées à l’immunité des muqueuses, à la biologie vasculaire et au remodelage de la matrice extracellulaire, et une expression altérée a été rapportée dans des contextes impliquant l’inflammation, l’allergie et des phénotypes du microenvironnement tumoral. Ces caractéristiques font d’AOC1 une cible pertinente pour des études mécanistiques du métabolisme de l’histamine, des réponses au stress oxydant et de la communication intercellulaire dans des systèmes modèles humains.

Les particules d'activation lentivirales ABP1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AOC1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ABP1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AOC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ABP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AOC1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.