ABP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410674-ACT

O AOC1 humano codifica a amina oxidase 1 contendo cobre (também conhecida como ABP1/DAO), uma enzática secretada e associada à membrana que catalisa a desaminação oxidativa de aminas biogênicas, como histamina e putrescina, produzindo aldeídos, amônia e peróxido de hidrogênio. Por meio da regulação do tônus de aminas extracelulares e da geração de espécies reativas de oxigênio, o AOC1 influencia a sinalização inflamatória, a biologia da barreira epitelial e vias sensíveis ao estado redox no microambiente tecidual. Alterações na atividade ou na expressão de AOC1 têm sido associadas a desregulação do metabolismo da histamina e de respostas imunes, e vêm sendo investigadas em contextos que incluem inflamação associada a alergias, função da mucosa gastrointestinal e biologia do estroma associado a tumores. Essas propriedades tornam o AOC1 um alvo útil para estudos mecanísticos de catabolismo de aminas, estresse oxidativo e sinalização célula–célula mediada por metabólitos extracelulares.

ABP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AOC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AOC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AOC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AOC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABP1 em células tumorais com expressão de AOC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.