ABHD14B Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410211-LAC

ABHD14B (domínio abhidrolase contendo 14B) codifica uma proteína da família das hidrolases de serina, implicada na regulação do metabolismo celular de lipídios e de pequenas moléculas por meio da hidrólise de ligações éster/amida. Como membro da superfamília com dobra α/β-hidrolase, o ABHD14B pode influenciar a homeostase metabólica, o manejo de lipídios associado a organelas e processos de sinalização a jusante que podem se cruzar com respostas ao estresse e vias inflamatórias. A expressão e a variação funcional de enzimas da família ABHD têm sido associadas a alterações na bioenergética e na remodelação de lipídios de membrana, características frequentemente observadas na disfunção metabólica e em estados celulares relevantes para o câncer. Assim, o ABHD14B constitui um alvo acessível para estudos mecanísticos que conectem a atividade hidrolásica a fenótipos em nível de vias em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ABHD14B (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ABHD14B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ABHD14B (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ABHD14B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ABHD14B. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ABHD14B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.