5α-Reductase 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402151-ACT

SRD5A1 codifica a 5α-redutase 1 humana, uma oxidorredutase microsomal dependente de NADPH que catalisa a conversão da testosterona no androgénio mais potente di-hidrotestosterona (DHT). Esta etapa enzimática é central no metabolismo das hormonas esteroides e na sinalização do recetor de androgénios, influenciando programas transcricionais que regulam a proliferação, a diferenciação e a homeostase lipídica em tecidos responsivos a androgénios. A atividade de SRD5A1 está implicada na regulação endócrina e tem sido associada à biologia de doenças impulsionadas por androgénios, incluindo alterações no fluxo esteroidogénico em cancros hormono-responsivos e em condições dermatológicas. Como enzima associada à membrana do retículo endoplasmático, a 5α-redutase 1 também constitui um ponto acessível para investigar a comunicação cruzada entre a biossíntese de esteroides, a sinalização de recetores nucleares e o metabolismo celular.

5α-Reductase 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRD5A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

5α-Reductase 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRD5A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRD5A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 5α-Reductase 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRD5A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 5α-Reductase 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 5α-Reductase 1 em células tumorais com expressão de SRD5A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.