4E-BP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420149-ACT

O gene murino **Eif4ebp1** codifica a **4E-BP1**, um repressor da tradução sensível à fosforilação que se liga ao **eIF4E** para restringir a tradução dependente de cap e a síntese proteica global. Em resposta a fatores de crescimento e nutrientes, a fosforilação de 4E-BP1 mediada por **mTORC1** libera o eIF4E, promovendo a montagem do complexo **eIF4F** e programas seletivos de tradução que regulam o crescimento celular, o metabolismo, a adaptação ao estresse e a proliferação. Esse nó integra a sinalização **PI3K–AKT–mTOR** com a biogênese de ribossomos e a proteostase, tornando **Eif4ebp1** um determinante-chave do controle traducional em contextos como a regulação metabólica e a sinalização oncogênica. Alterações no estado de fosforilação de 4E-BP1 e na disponibilidade de eIF4E são amplamente utilizadas como leituras da ativação da via e têm sido associadas a fenótipos de crescimento e sobrevivência desregulados em modelos relevantes para doenças.

4E-BP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Eif4ebp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

4E-BP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Eif4ebp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Eif4ebp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 4E-BP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Eif4ebp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 4E-BP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 4E-BP1 em células tumorais com expressão de Eif4ebp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.