3PGDH Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401405-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 3PGDHO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase 3PGDH (h) e o Plasmídeo Double Nickase 3PGDH (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PHGDH. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:3PGDH Anticorpo (B-1): sc-390610
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
3PGDH Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3PGDH Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHGDH codifica a 3-fosfoglicerato desidrogenase (3PGDH), a enzima limitante de velocidade que desvia o intermediário glicolítico 3-fosfoglicerato para a via de biossíntese da serina fosforilada. Ao produzir 3-fosfohidroxipiruvato e sustentar a disponibilidade de serina e glicina a jusante, a 3PGDH contribui para o metabolismo de um carbono, a síntese de nucleotídeos, o equilíbrio redox por meio de reações ligadas ao NADPH e o fluxo biossintético necessário a estados proliferativos. A atividade alterada de PHGDH tem sido associada à reprogramação metabólica em modelos de câncer e a distúrbios do neurodesenvolvimento ligados à deficiência de serina, ressaltando sua relevância para estudos de fenótipos celulares impulsionados pelo metabolismo. Essas funções tornam o PHGDH um nó útil para investigar a comunicação cruzada entre glicólise, homeostase de aminoácidos e processos dependentes de mitocôndrias/do ciclo do folato.
3PGDH O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PHGDH em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PHGDH. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PHGDH. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PHGDH interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.