3β-HSD6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420970

概要

マウスHsd3b6は、3β-ヒドロキシステロイドと3-ケトステロイドを相互変換することで、ステロイドホルモン生合成における重要な酸化還元反応を触媒するヒドロキシステロイド脱水素酵素である3β-HSD6をコードします。この活性はステロイド生成フラックスを支え、細胞内ステロイド恒常性の維持に寄与するとともに、下流の核内受容体シグナル伝達や、より広範な内分泌調節性の転写プログラムに影響を及ぼします。3β-HSDファミリーの機能が変化すると、アンドロゲン、エストロゲン、コルチコステロイドの前駆体プールがシフトし得るため、この酵素反応ノードは、生殖生物学、副腎／性腺の生理、代謝調節の研究と関連づけられます。したがってHsd3b6は、ステロイド生成酵素が組織特異的なシグナル伝達ネットワークや表現型をどのように形作るかを、マウスモデル系で解明するうえで重要です。

3β-HSD6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHsd3b6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hsd3b6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hsd3b6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、3β-HSD6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、3β-HSD6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hsd3b6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 3β-HSD6の機能に不可欠なHsd3b6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hsd3b6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 3β-HSD6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および3β-HSD6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hsd3b6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  3β-HSD6 HDRプラスミド（m）および 3β-HSD6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHsd3b6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHsd3b6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。