2X Laemmli Sample Buffer

O 2X Laemmli Sample Buffer é um reagente amplamente utilizado na investigação bioquímica e de biologia molecular, particularmente para a preparação de amostras de proteínas para eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida (SDS-PAGE). Com o nome do seu criador, Ulrich Laemmli, este tampão contém uma combinação de Tris-HCl, SDS, glicerol, β-mercaptoetanol (ou DTT) e corante azul de bromofenol. A composição do tampão assegura que as proteínas são desnaturadas, reduzidas e uniformemente carregadas, facilitando a sua separação com base no peso molecular durante a eletroforese. Em aplicações de investigação, o 2X Laemmli Sample Buffer desempenha um papel crucial na análise de proteínas. O componente SDS liga-se às proteínas, conferindo-lhes uma carga negativa proporcional ao seu comprimento, o que permite a separação das proteínas apenas por tamanho quando sujeitas a um campo elétrico. O agente redutor, β-mercaptoetanol ou DTT, quebra as ligações dissulfureto, assegurando que as proteínas são totalmente desnaturadas e que os polipéptidos individuais podem ser resolvidos com precisão. O glicerol aumenta a densidade da amostra, garantindo que esta se afunda nos poços do gel, enquanto o corante azul de bromofenol serve como corante de rastreio para monitorizar o progresso da eletroforese. Os investigadores confiam no tampão de amostras 2X Laemmli para preparar amostras para várias aplicações a jusante, tais como Western blotting, espetrometria de massa e outras análises proteómicas. A sua preparação consistente e fiável de amostras ajuda na caraterização detalhada da expressão proteica, modificações pós-traducionais e interacções proteína-proteína, tornando-a indispensável no estudo de processos celulares e vias bioquímicas.