κ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406821

概要

CSN3はκ-カゼインをコードしており、κ-カゼインは分泌性リン酸化タンパク質で、乳中のカゼインミセルの構成要素として古典的に知られています。そこでタンパク質の可溶性維持やリン酸カルシウムの組織化に寄与します。細胞外グリコプロテインであるκ-カゼインは、タンパク質間相互作用や分泌動態に影響する翻訳後修飾を受けるため、分泌経路におけるプロセシングやプロテアーゼ切断の研究に適したモデル基質となります。CSN3の生物学的役割は授乳に関連する文脈で最もよく定義されていますが、κ-カゼインの配列や糖鎖付加の変動は、タンパク質安定性の変化や生理活性ペプチドの産生と関連づけられており、細胞外タンパク質のプロセシングとシグナル伝達の機構研究において重要です。ヒトの系では、CSN3は分泌タンパク質発現の制御や、プロテオリシスによって生じるペプチドが細胞応答に及ぼす下流効果を解析するための扱いやすい座位として利用されます。

κ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCSN3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CSN3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CSN3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、κ-caseinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、κ-caseinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CSN3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• κ-caseinの機能に不可欠なCSN3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CSN3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• κ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびκ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CSN3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  κ-casein HDRプラスミド（h）および κ-casein HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCSN3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCSN3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。