γ-cateninCRISPR激活质粒(h): sc-401640-ACT

JUP 编码 γ-连环蛋白（plakoglobin），这是一种含犰狳（armadillo）重复结构的蛋白质，作为桥粒和黏着连接的核心组成成分，连接钙黏蛋白复合体与中间丝以及与肌动蛋白相关的网络，从而维持上皮组织和心脏组织的完整性。通过与桥粒芯糖蛋白（desmogleins）、桥粒胶原蛋白（desmocollins）、桥粒斑蛋白（plakophilins）以及桥粒斑蛋白连接素（desmoplakin）的相互作用，γ-连环蛋白协同调控细胞连接的组装、力学信号转导（mechanotransduction），以及依赖细胞接触的细胞迁移与分化调控。γ-连环蛋白还通过调节转录程序以及连接到细胞核的信号动态，与 Wnt/β-连环蛋白信号通路发生串扰。JUP 的表达失衡或在连接处的定位异常与黏附改变、侵袭性行为以及心肌细胞结构缺陷相关，因此在研究屏障功能、组织重塑和疾病相关信号方面具有重要意义。

γ-catenin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性JUP的表达。

γ-catenin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的JUP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于JUP转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性γ-catenin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的JUP位点，并能够研究内源性位点上依赖于γ-catenin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在JUP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟γ-catenin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。