γC-crystallin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402940-ACT

CRYGC はヒト γC-クリスタリンをコードしており、γC-クリスタリンは眼の水晶体に非常に豊富に存在する構造タンパク質である。安定で緻密に詰み合ったタンパク質複合体を形成することで、屈折率の維持と長期的な透明性に寄与する。β/γ-クリスタリンスーパーファミリーの一員として、γC-クリスタリンは、タンパク質のターンオーバーが最小限に抑えられた条件下でも、水晶体線維細胞の構築とプロテオスタシスを支える。クリスタリンの恒常性が破綻するとタンパク質のミスフォールディングや凝集が促進され得るため、CRYGC の異常は水晶体混濁の表現型と関連付けられている。そのため CRYGC は、水晶体の発生、ストレス応答、ならびに白内障の生物学に関わるタンパク質凝集過程を研究するうえで、マーカーとして、また機構解明の足がかりとして広く用いられている。

γC-crystallin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CRYGCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γC-crystallin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CRYGC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCRYGC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γC-crystallinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCRYGC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγC-crystallin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCRYGC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγC-crystallin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。