γ2 Tubulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400328-ACT

TUBG2 codifica a tubulina γ2 humana, um membro especializado da superfamília das tubulinas que contribui para a nucleação e a organização de microtúbulos nos centros organizadores de microtúbulos por meio de interações com o complexo em anel de γ-tubulina (γ-TuRC). Ao regular a montagem do fuso, a função do centrossomo e a dinâmica global dos microtúbulos, a tubulina γ2 influencia a progressão do ciclo celular, a fidelidade mitótica e processos de transporte intracelular. A perturbação das vias de nucleação de microtúbulos pode levar à instabilidade cromossômica e a programas neuronais e proliferativos alterados, tornando o TUBG2 um alvo relevante para o estudo da regulação do citoesqueleto em contextos de desenvolvimento e associados a doenças.

γ2 Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ2 Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ2 Tubulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ2 Tubulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ2 Tubulin em células tumorais com expressão de TUBG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.