γ2-COP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403467-ACT

O COPG2 codifica a subunidade humana γ2-COP do complexo coatômero COPI, um mediador central do brotamento de vesículas e do transporte retrógrado do Golgi para o retículo endoplasmático, bem como do transporte entre cisternas do Golgi. A γ2-COP contribui para a seleção de carga e para a montagem do revestimento que mantêm a arquitetura do Golgi, a fidelidade da via secretora e a homeostase de membranas, conectando a função do COPI à maturação proteica e às redes de tráfego intracelular. A perturbação do tráfego dependente de coatômero pode afetar respostas ao estresse do RE, o manejo de lipídios e a proteostase, processos frequentemente alterados em contextos de doenças proliferativas e neurodegenerativas. Assim, o COPG2 é relevante para estudos mecanísticos de transporte vesicular, dinâmica Golgi–RE e consequências em nível de via decorrentes de alterações no tráfego intracelular.

γ2-COP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ2-COP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ2-COP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ2-COP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ2-COP em células tumorais com expressão de COPG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.