ΔN p73 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-437274-ACT

A ΔN p73 humana é uma isoforma de TP73 truncada na extremidade N-terminal que modula programas transcricionais que controlam a progressão do ciclo celular, a resistência à apoptose, a diferenciação e as respostas celulares ao estresse. Por não possuir o domínio canônico de transativação, a ΔN p73 pode atuar de forma dominante-negativa em relação a membros da família p53, remodelando redes de sinalização a jusante que governam as respostas a danos no DNA e a apoptose mitocondrial. Alterações na expressão de ΔN p73 têm sido associadas a fenótipos de proliferação e sobrevivência desregulados em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia tumoral e processos do neurodesenvolvimento. Sua atividade se cruza com o controle de checkpoints, a regulação da cromatina e a expressão gênica específica de linhagem, tornando-a um nó útil para estudar a reconfiguração de vias da família p53.

ΔN p73 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ΔN p73 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ΔN p73. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ΔN p73 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ΔN p73 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.