β Enolase Plasmide Double Nickase (h): sc-400843-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β Enolase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β Enolase Double Nickase Plasmid (h) e il β Enolase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ENO3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: β Enolase Antibody (XX-10): sc-100811
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β Enolase Plasmide Double Nickase (h) | sc-400843-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β Enolase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400843-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ENO3 codifica la β-enolasi umana (ENO3), un enzima glicolitico arricchito nel muscolo che catalizza la conversione del 2-fosfoglicerato in fosfoenolpiruvato, sostenendo la produzione di ATP nei tessuti ad alto fabbisogno energetico. Oltre alla glicolisi, le isoforme dell’enolasi contribuiscono alla riprogrammazione metabolica e alle risposte cellulari allo stress grazie a collegamenti con la segnalazione dell’ipossia e con una regolazione più ampia dei flussi di carbonio. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di ENO3 sono state associate a patologie del muscolo scheletrico e a fenotipi miopatici, e vengono studiate in contesti di disfunzione metabolica e rimodellamento tissutale. Come marcatore dello stato metabolico muscolare, ENO3 è spesso utilizzato per indagare cambiamenti nel metabolismo energetico, nella differenziazione e nella proteostasi in modelli cellulari umani.
β Enolase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ENO3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ENO3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ENO3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ENO3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.