βENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422826
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- βENaC O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico βENaC, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:βENaC Anticorpo (D-3): sc-25354
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
βENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422826 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Scnn1b codifica a subunidade β murina do canal epitelial de sódio (βENaC), um componente central da captação de Na⁺ sensível à amilorida através das membranas apicais de células epiteliais. Em conjunto com as subunidades α e γ, a βENaC ajuda a regular o transporte transepitelial de sódio, a hidratação do líquido da superfície das vias aéreas e a fisiologia da barreira epitelial. A atividade do ENaC é rigidamente regulada por ativação proteolítica, tráfego de membrana e degradação dependente de ubiquitina via a via do NEDD4L, ligando o Scnn1b à homeostase iónica e às respostas ao stress epitelial. A função alterada do ENaC é amplamente estudada em modelos de obstrução das vias aéreas por muco e depuração mucociliar comprometida, bem como no manuseio renal de sódio e na regulação da pressão arterial.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO βENaC (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Scnn1b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Scnn1b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Scnn1b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína βENaC.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Scnn1b para a investigação da sinalização de βENaC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Scnn1b críticos para a função βENaC
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Scnn1b para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo βENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo βENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Scnn1b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo βENaC Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR βENaC (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Scnn1b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Scnn1b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.