βB2-crystallin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403626-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- βB2-crystallinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase βB2-crystallin (h) e o Plasmídeo Double Nickase βB2-crystallin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CRYBB2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:βB2-crystallin Anticorpo (B-12): sc-376006
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
βB2-crystallin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB2-crystallin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB2 codifica a βB2-cristalina humana, uma importante proteína estrutural do cristalino ocular que sustenta a arquitetura das células das fibras do cristalino e a transparência a longo prazo. Como membro da superfamília β/γ-cristalina, a βB2-cristalina contribui para o empacotamento em alta concentração de proteínas e para as propriedades refrativas, ao mesmo tempo em que mantém a proteostase por meio de interações do tipo chaperona que limitam a agregação sob estresse oxidativo e relacionado ao envelhecimento. Alterações na expressão de CRYBB2 ou a desestabilização da proteína estão associadas à perturbação da homeostase do cristalino e a fenótipos ligados à catarata, tornando-o um modelo útil para estudar estabilidade proteica, respostas ao estresse e programas de diferenciação do cristalino. A βB2-cristalina também oferece um sistema acessível para investigar como redes conservadas de cristalinas respondem ao desequilíbrio redox e ao estresse proteotóxico em contextos celulares oculares e não oculares.
βB2-crystallin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CRYBB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CRYBB2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CRYBB2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CRYBB2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.