β-Arrestin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416686-ACT

ARRB2 codifica a β-arrestina-2, um adaptador multifuncional que regula a dessensibilização, a internalização e o tráfego de receptores acoplados à proteína G (GPCRs) após a fosforilação do receptor por GRKs. Além de encerrar a sinalização mediada por proteínas G, a β-arrestina-2 atua como plataforma para complexos de sinalização que modulam as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, moldando a duração do sinal e a sua localização subcelular. Por meio dessas interações, a ARRB2 influencia a migração celular, a sinalização inflamatória e a sinalização enviesada de receptores em diversos sistemas de GPCR. A sinalização dependente de β-arrestina desregulada tem sido associada na literatura a redes de sinalização relacionadas ao câncer, à regulação cardiometabólica e a processos neuroimunes, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos focados em vias.

β-Arrestin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARRB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-Arrestin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARRB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARRB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-Arrestin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARRB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-Arrestin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-Arrestin-2 em células tumorais com expressão de ARRB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.