β3Gn-T1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411554-ACT

B4GAT1 codifica a β3Gn-T1, uma glicosiltransferase que sustenta a síntese e a remodelação de glicoconjugados ao catalisar reações de transferência de β1,3-N-acetilglicosamina que contribuem para o alongamento de cadeias de glicanos. Por meio do seu papel na glicosilação de proteínas e lipídios, a β3Gn-T1 influencia o tráfego de membrana, a organização de receptores e as interações com a matriz extracelular que moldam a comunicação célula–célula e a sinalização dependente de adesão. Programas de glicosilação alterados envolvendo B4GAT1 têm sido investigados em contextos de regulação do desenvolvimento e de alterações associadas a doenças na composição de glicanos, em que mudanças nas glicoproteínas de superfície podem impactar o reconhecimento imune e redes de sinalização. Essas propriedades tornam B4GAT1 um alvo útil para estudar a modulação de vias dependentes de glicosilação e fenótipos ligados aos glicanos de superfície celular.

β3Gn-T1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B4GAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β3Gn-T1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B4GAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B4GAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β3Gn-T1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B4GAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β3Gn-T1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β3Gn-T1 em células tumorais com expressão de B4GAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.