β1-Adaptin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402948-ACT

AP1B1 codifica a β1-adaptina, uma subunidade central do complexo de proteínas adaptadoras 1 (AP-1), que acopla o reconhecimento de carga à formação de vesículas mediada por clatrina na rede trans-Golgi e nos endossomos. Ao ligar-se a motivos de triagem em proteínas transmembranares, o AP-1 coordena o tráfego polarizado, a reciclagem endossomal e a manutenção da composição da membrana em células epiteliais e neurônios. A disrupção do transporte dependente de AP-1 perturba a localização de receptores e os resultados da sinalização, relacionando a disfunção de AP1B1 a defeitos de polaridade celular, processos do neurodesenvolvimento e homeostase de proteínas de membrana. Como um nó central no tráfego intracelular, a β1-adaptina é frequentemente estudada no contexto da dinâmica endossomo–Golgi, da fidelidade na triagem de cargas e da comunicação entre organelas.

β1-Adaptin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AP1B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β1-Adaptin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AP1B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AP1B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β1-Adaptin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AP1B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β1-Adaptin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β1-Adaptin em células tumorais com expressão de AP1B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.