β-1,4-GalNAc-T4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410420-ACT

B4GALNT4 codifica a β-1,4-GalNAc-T4, uma glicosiltransferase residente no Golgi que transfere N-acetilgalactosamina para aceitadores glicoconjugados, moldando estruturas de glicanos terminais em glicoproteínas e glicolipídios. Por meio do seu papel na biossíntese e no remodelamento de glicanos, a β-1,4-GalNAc-T4 pode influenciar o tráfego de proteínas, a organização de receptores e processos de reconhecimento célula–célula que dependem de padrões de glicosilação na superfície celular. A expressão ou a atividade alteradas de GalNAc-transferases são frequentemente estudadas no contexto de glicosilação desregulada, uma característica marcante associada a mudanças em adesão, sinalização e interações imunes na biologia de doenças. Como resultado, B4GALNT4 é relevante para pesquisas sobre vias dependentes de glicosilação e modulação de fenótipos em modelos celulares humanos.

β-1,4-GalNAc-T4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B4GALNT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-1,4-GalNAc-T4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B4GALNT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B4GALNT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-1,4-GalNAc-T4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B4GALNT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-1,4-GalNAc-T4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-1,4-GalNAc-T4 em células tumorais com expressão de B4GALNT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.