β-1,3-Gal-T5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409777-ACT

B3GALT5 codifica a β-1,3-Gal-T5, uma β1,3-galactosiltransferase residente no Golgi que contribui para a síntese e o alongamento de glicolipídios e glicoproteínas ao adicionar galactose em ligação β1,3 a aceitadores que contêm N-acetilglucosamina. Por meio do seu papel na glicosilação, a β-1,3-Gal-T5 influencia a composição de glicanos na superfície celular, que governa o tráfego de proteínas, a organização de recetores e as interações célula–célula mediadas por lectinas. Alterações na atividade de B3GALT5 podem modificar programas de sinalização e adesão dependentes de glicanos, implicados no reconhecimento imunitário, na diferenciação epitelial e em fenótipos de glicosilação associados a tumores. Assim, B3GALT5 é um alvo útil para investigar como redes de glicosiltransferases regulam a biologia de membranas e alterações no comportamento celular relevantes para doenças.

β-1,3-Gal-T5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B3GALT5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-1,3-Gal-T5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B3GALT5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B3GALT5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-1,3-Gal-T5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B3GALT5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-1,3-Gal-T5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-1,3-Gal-T5 em células tumorais com expressão de B3GALT5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.