α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423331

概要

Tecta は、内耳の蓋膜（tectorial membrane）に存在する主要な非コラーゲン性糖タンパク質である α-テクトリンをコードしており、細胞外マトリックスの構築、力学的カップリング、ならびに蝸牛有毛細胞における効率的な機械電気変換に寄与する。α-テクトリンは蓋膜の粘弾性特性と微細構造を形成することで、周波数選択性（チューニング）と音に対する感度を支える。Tecta の異常は聴覚機能障害の表現型と関連しており、有毛細胞の刺激を規定する感覚上皮の発生や、マトリックス依存的シグナル伝達を解明するための有用な標的となる。

α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTecta遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tecta内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tectaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-tectorinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-tectorinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tecta欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-tectorinの機能に不可欠なTectaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tectaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα-tectorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tecta遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-tectorin HDRプラスミド（m）および α-tectorin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTectaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTecta標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。