α-taxilin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404316-ACT

O gene humano TXLNA codifica a α-taxilina, uma proteína citosólica que se associa a sintaxinas e a outros componentes da maquinaria SNARE para dar suporte ao tráfego vesicular e à exocitose regulada. Por meio de suas interações com fatores de fusão de membranas, a α-taxilina contribui para processos de transporte intracelular que influenciam a secreção, a entrega de proteínas de membrana e a dinâmica de sinalização. Alterações na expressão de TXLNA foram relatadas em múltiplos contextos patológicos, o que motiva estudos sobre como o transporte vesicular e as vias ligadas a SNARE se intersectam com respostas a estresse celular e controle de crescimento. Essas características fazem de TXLNA um alvo útil para investigar a regulação do estado celular dependente de tráfego e fenótipos relevantes para doenças.

α-taxilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TXLNA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-taxilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TXLNA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TXLNA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-taxilin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TXLNA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-taxilin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-taxilin em células tumorais com expressão de TXLNA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.