α_1A-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419021-ACT

O gene murino Adra1a codifica o receptor adrenérgico alfa1A (α1A-AR), um receptor acoplado à proteína G que se acopla predominantemente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, aumentar a sinalização de IP3/DAG, mobilizar Ca2+ intracelular e estimular respostas dependentes de PKC. A sinalização do α1A-AR modula o tônus da musculatura lisa, a resistência vascular e a regulação simpática em tecidos cardiovasculares e urogenitais, e também influencia a excitabilidade neuronal e a sinalização sináptica no sistema nervoso central. O acionamento das vias a jusante intersecta-se com a sinalização MAPK/ERK e com programas transcricionais que controlam contração, metabolismo e respostas ao estresse. A atividade desregulada de receptores adrenérgicos e alterações na expressão do receptor têm sido implicadas em modelos de hipertensão, disfunção do trato urinário inferior e fenótipos neurocomportamentais, apoiando o Adra1a como um alvo para estudos mecanísticos de redes de sinalização simpática.

α1A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Adra1a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α1A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Adra1a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Adra1a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α1A-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Adra1a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α1A-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α1A-AR em células tumorais com expressão de Adra1a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.