α-parvin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405769-ACT

PARVA codifica a α-parvina, um adaptador de adesões focais que liga a sinalização de integrinas ao citoesqueleto de actina por meio de interações com a integrin-linked kinase (ILK) e com as proteínas PINCH. Ao organizar o complexo ILK–PINCH–parvina, a α-parvina ajuda a coordenar a adesão celular, o espalhamento e a migração, influenciando vias de mecanotransdução e de remodelação do citoesqueleto. Assim, a atividade de PARVA é relevante para processos como a deteção da matriz extracelular, a dinâmica de lamelipódios e a sinalização de sobrevivência celular. A desregulação da sinalização de adesões focais envolvendo PARVA tem sido associada a alterações da arquitetura tecidual e a comportamentos celulares invasivos, tornando-o um nó útil para estudar fenótipos dependentes de adesão em modelos relevantes para a doença.

α-parvin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PARVA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-parvin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PARVA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PARVA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-parvin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PARVA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-parvin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-parvin em células tumorais com expressão de PARVA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.