α-KGD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402915-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α-KGDO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase α-KGD (h) e o Plasmídeo Double Nickase α-KGD (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para OGDH. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α-KGD Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-KGD Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OGDH humano codifica o componente E1 do complexo 2-oxoglutarato desidrogenase (α-KGD), uma enzima que influencia a velocidade do ciclo do ácido tricarboxílico (TCA) e que converte o α-cetoglutarato em succinil-CoA, ao mesmo tempo em que gera NADH. Essa reação integra o fluxo de carbono mitocondrial ao equilíbrio redox celular e sustenta a fosforilação oxidativa, a anaplerose e o metabolismo de aminoácidos por meio do nó do α-cetoglutarato. A atividade de OGDH também conecta o metabolismo mitocondrial ao controle de espécies reativas de oxigênio e às respostas ao estresse via produção de NADH e pelo transporte eletrônico a jusante. A desregulação de vias associadas a OGDH/α-KGD tem sido implicada no remodelamento metabólico observado em doenças neurológicas e na adaptação bioenergética relacionada ao câncer, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos da função mitocondrial.
α-KGD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus OGDH em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de OGDH. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função OGDH. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com OGDH interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.