α-KGD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402915-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α-KGD CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- α-KGD CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- α-KGD CRISPR活性化プラスミド（h）およびα-KGD CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、OGDH転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α-KGD CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-402915-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
α-KGD CRISPR Activationプラスミド (h2) | sc-402915-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
OGDHは、ミトコンドリアの2-オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体（α-KGD）のE1コンポーネントをコードしており、TCA（トリカルボン酸）回路における律速酵素の一つです。この複合体は、α-ケトグルタル酸をスクシニルCoAに変換すると同時に、酸化的リン酸化のためのNADHを産生します。α-ケトグルタル酸のフラックス制御を介して、OGDHは中核的な炭素代謝をアミノ酸分解、レドックス恒常性、ならびにミトコンドリア由来の活性酸素種（ROS）の処理と結び付けています。OGDH活性の変化は、ジオキシゲナーゼを介したエピジェネティック制御に影響するα-ケトグルタル酸および関連代謝物の量を変動させ得るため、ミトコンドリア代謝とクロマチン状態の連関に関与します。この結節点の破綻（ディスレギュレーション）はミトコンドリア代謝機能障害と関連しており、神経変性やがん代謝などの文脈で研究されています。
α-KGD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OGDHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
α-KGD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OGDH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOGDH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性α-KGDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOGDH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるα-KGD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOGDH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるα-KGD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。