αENaC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422825

Descripción general

Scnn1a codifica la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (αENaC), un componente limitante de la velocidad de la absorción de Na⁺ sensible a amilorida a través de las membranas apicales en vías respiratorias, riñón y otros epitelios. αENaC se ensambla con las subunidades β y γ para controlar el transporte transepitelial de sodio, influyendo así en la homeostasis del líquido de la superficie de las vías aéreas y en el equilibrio renal de sodio. La actividad del canal se regula mediante activación proteolítica y recambio dependiente de ubiquitina, con participación destacada de la endocitosis mediada por Nedd4-2 y de señales hormonales que ajustan el manejo del sodio. La desregulación del transporte iónico dependiente de ENaC se utiliza ampliamente como marco mecanístico para estudiar el desequilibrio de líquidos epiteliales, la deshidratación del moco y la fisiología sensible a la sal en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO αENaC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scnn1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scnn1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scnn1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína αENaC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scnn1a para la investigación de la señalización de αENaC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scnn1a críticos para la función de αENaC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scnn1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido αENaC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido αENaC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scnn1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR αENaC (m) y el plásmido HDR αENaC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scnn1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scnn1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.