Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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αENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422825
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- αENaC O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico αENaC, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
αENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422825 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Scnn1a codifica a subunidade alfa do canal epitelial de sódio (αENaC), um componente limitante da taxa de absorção de Na⁺ sensível à amilorida através das membranas apicais nas vias aéreas, no rim e noutros epitélios. A αENaC associa-se às subunidades β e γ para controlar o transporte transepitelial de sódio, influenciando assim a homeostase do líquido de superfície das vias aéreas e o equilíbrio renal de sódio. A atividade do canal é regulada por ativação proteolítica e renovação dependente de ubiquitina, envolvendo de forma proeminente a endocitose mediada por Nedd4-2 e sinais hormonais que ajustam o manuseamento de sódio. A desregulação do transporte iónico dependente de ENaC é amplamente utilizada como enquadramento mecanístico para estudar desequilíbrios de fluidos epiteliais, desidratação do muco e fisiologia sensível ao sal em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO αENaC (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Scnn1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Scnn1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Scnn1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína αENaC.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Scnn1a para a investigação da sinalização de αENaC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Scnn1a críticos para a função αENaC
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Scnn1a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo αENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo αENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Scnn1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo αENaC Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR αENaC (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Scnn1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Scnn1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.