α/β-dystroglycan Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-417547-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α/β-dystroglycanO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase α/β-dystroglycan (h) e o Plasmídeo Double Nickase α/β-dystroglycan (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DAG1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:α-dystroglycan Anticorpo (IIH6): sc-53987
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α/β-dystroglycan Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-417547-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α/β-dystroglycan Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-417547-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAG1 codifica a distroglicana, um recetor de superfície celular que se liga à laminina e que é processado pós-traducionalmente em α-distroglicana e β-distroglicana, sendo então montado no complexo distrofina–glicoproteína. Este complexo liga a matriz extracelular ao citoesqueleto de actina, sustentando a organização da membrana basal, a estabilidade da membrana e a mecanotransdução no músculo esquelético e noutros tecidos. A função da distroglicana está intimamente ligada à ligação de ligandos e à sinalização dependentes de glicosilação nos locais de adesão, integrando sinais da matriz extracelular com a remodelação do citoesqueleto. A perturbação da expressão de DAG1 ou do processamento/glicosilação da distroglicana está associada a distroglicanopatias e a fenótipos neuromusculares relacionados, tornando-o um ponto-chave para estudar interações célula–matriz e a integridade dos tecidos.
α/β-dystroglycan O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DAG1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DAG1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DAG1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DAG1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.