α-actinin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418972
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α-actinin-3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico α-actinin-3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:α-actinin Anticorpo (H-2): sc-17829
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α-actinin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-418972 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Actn3 codifica a α-actinina-3, uma proteína sarcomérica de ligação à actina enriquecida no disco Z de fibras musculares esqueléticas de contração rápida, onde faz ligações cruzadas e estabiliza os filamentos finos durante a contração. Ao organizar o aparato contrátil e contribuir para a mecânica do sarcómero, a α-actinina-3 influencia características de desempenho muscular e propriedades do tipo de fibra associadas ao metabolismo glicolítico e à resposta à carga mecânica. A perda de função da α-actinina-3 está associada a fenótipos alterados de força e resistência muscular e tem sido investigada no contexto de miopatias, perda de massa muscular e adaptação ao exercício ou ao desuso. Em modelos murinos, Actn3 oferece um sistema acessível para estudar redes estruturais miofibrilares e vias que regulam a contratilidade, a remodelação muscular e as respostas ao stress.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-actinin-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Actn3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Actn3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Actn3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-actinin-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Actn3 para a investigação da sinalização de α-actinin-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Actn3 críticos para a função α-actinin-3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Actn3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo α-actinin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo α-actinin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Actn3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo α-actinin-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR α-actinin-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Actn3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Actn3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.