α-actinin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401186
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- α-actinin-2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico α-actinin-2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:α-actinin Anticorpo (H-2): sc-17829
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
α-actinin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401186 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ACTN2 codifica a α-actinina-2, uma proteína de ligação à actina modulada por Ca2+ que faz pontes entre filamentos de actina (F-actina) e ancora redes do citoesqueleto a estruturas de adesão e contráteis. No músculo estriado, a α-actinina-2 é um componente central do disco Z, organizando a arquitetura do sarcómero e sustentando a transmissão de força por meio de interações com a actina, complexos associados à titina e outras proteínas de suporte/ancoragem. Para além das funções estruturais, ACTN2 contribui para vias de mecanotransdução e de remodelação do citoesqueleto que influenciam a tensão celular, a sinalização no costâmero e a montagem de miofibrilas. A disrupção genética ou variações em ACTN2 têm sido associadas a fenótipos de cardiomiopatia e a alterações da função muscular, tornando-o relevante para estudos sobre a integridade do sarcómero e a sinalização responsiva ao stress.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-actinin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ACTN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ACTN2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ACTN2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-actinin-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ACTN2 para a investigação da sinalização de α-actinin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ACTN2 críticos para a função α-actinin-2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ACTN2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo α-actinin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo α-actinin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ACTN2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo α-actinin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR α-actinin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ACTN2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ACTN2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.