α3e Tubulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400023-ACT

TUBA3E codifica a tubulina α3e, uma subunidade que se liga à β-tubulina e polimeriza formando microtúbulos, sustentando a arquitetura do citoesqueleto, o transporte intracelular e a formação e função do fuso mitótico. Como componente central da rede de microtúbulos, a tubulina α3e contribui para processos como a progressão do ciclo celular, o posicionamento de organelas e o crescimento de neuritos por meio da montagem e remodelação dinâmicas dos microtúbulos. Isótipos de tubulina podem modular a estabilidade dos microtúbulos e suas interações com proteínas associadas a microtúbulos e complexos motores, influenciando vias que regulam a proliferação e a polaridade celular. Dinâmicas de microtúbulos desreguladas e padrões alterados de expressão de tubulina são frequentemente associados à instabilidade cromossômica e à divisão celular aberrante observadas em múltiplos contextos de doença, reforçando a importância de estudos mecanísticos sobre a regulação do citoesqueleto.

α3e Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBA3E sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α3e Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBA3E em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBA3E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α3e Tubulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBA3E nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α3e Tubulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α3e Tubulin em células tumorais com expressão de TUBA3E silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.