ZNF649 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418512-ACT

ZNF649 codifica um fator de transcrição do tipo dedo de zinco C2H2 implicado na ligação ao DNA de modo específico à sequência e na regulação de programas de expressão gênica que influenciam a identidade celular e processos associados à cromatina. Como proteína reguladora nuclear, o ZNF649 é frequentemente considerado no contexto de redes mais amplas ligadas a dedos de zinco KRAB que modulam a dinâmica de repressão/ativação transcricional, podendo afetar a progressão do ciclo celular, a diferenciação e vias de resposta ao estresse. A regulação alterada de fatores de transcrição do tipo dedo de zinco tem sido associada a circuitos transcricionais desregulados no câncer e em outras doenças caracterizadas por controle epigenético aberrante, tornando o ZNF649 relevante para estudos mecanísticos de homeostase transcricional. Investigar a atividade do ZNF649 pode ajudar a esclarecer como eventos de ligação em promotores e enhancers moldam a sinalização a jusante e redes regulatórias de genes em células humanas.

ZNF649 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF649 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF649 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF649 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF649, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF649. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF649 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF649 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF649 em células tumorais com expressão de ZNF649 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.