ZFP57 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404270-ACT

O ZFP57 humano codifica uma proteína KRAB com dedos de zinco que se liga ao DNA metilado em regiões de controlo de imprinting e recruta KAP1/TRIM28 e modificadores de cromatina associados para preservar a metilação do DNA e marcas repressivas de histonas durante o desenvolvimento inicial. Por meio desta função de manutenção epigenética, o ZFP57 sustenta o imprinting genómico, a regulação génica específica do alelo e o silenciamento transcricional estável em loci selecionados. A perturbação de programas de imprinting ligados ao ZFP57 está associada a padrões anormais de metilação e desregulação do desenvolvimento, tornando-o relevante para estudos de doenças de imprinting e da estabilidade do epigenoma. Assim, o ZFP57 é amplamente utilizado como um fator modelo para investigar a manutenção da metilação do DNA, a repressão mediada por KRAB e vias de remodelação da cromatina.

ZFP57 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZFP57 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZFP57 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZFP57 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZFP57, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZFP57. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZFP57 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZFP57 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZFP57 em células tumorais com expressão de ZFP57 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.