ZFP100 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411821-ACT

O ZNF473 humano codifica a proteína de dedo de zinco ZFP100, um regulador transcricional putativo de ligação ao DNA caracterizado por domínios de dedo de zinco do tipo C2H2, comumente associados ao controle específico por sequência da expressão gênica. Ao modular a atividade de promotores e enhancers, espera-se que a ZFP100 influencie programas transcricionais dependentes de cromatina que moldam a identidade celular, as respostas ao estresse e vias relacionadas à diferenciação. A regulação alterada de fatores de transcrição com dedo de zinco é frequentemente associada a estados epigenéticos desregulados e a redes de sinalização aberrantes, tornando o ZNF473 um locus útil para investigar mecanismos de controle transcricional em contextos relevantes para doenças. A caracterização de redes gênicas dependentes de ZFP100 pode apoiar estudos de remodelamento de vias, função de elementos regulatórios e alterações transcriptômicas em células humanas.

ZFP100 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF473 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZFP100 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF473 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF473, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZFP100. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF473 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZFP100 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZFP100 em células tumorais com expressão de ZNF473 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.