ZCCHC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418151

Übersicht

ZCCHC6 (auch bekannt als TUT7) kodiert eine terminale Uridylyltransferase mit CCHC-Zinkfinger-Motiv, die die 3′-Uridylierung verschiedener RNA-Substrate katalysiert und dadurch RNA-Stabilität und -Abbau beeinflusst. Es ist ein zentraler Effektor der posttranskriptionellen Genregulation, wirkt auf Vorstufen- und reife miRNAs und ist an Signalwegen beteiligt, die das Anfügen von RNA-Schwänzen mit dem exonukleolytischen Abbau koppeln. ZCCHC6 wurde mit der Regulation angeborener Immun- und stressresponsiver Transkriptome in Verbindung gebracht, indem es RNA-Prozessierung und -Überwachung (Surveillance) moduliert. Eine fehlregulierte RNA-Uridylierung und veränderte ZCCHC6-Aktivität wurden mit Störungen der miRNA-Homöostase und Genexpressionsprogrammen assoziiert, die für Krebs und entzündliche Phänotypen relevant sind.

Das ZCCHC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZCCHC6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZCCHC6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZCCHC6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZCCHC6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZCCHC6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZCCHC6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZCCHC6-Exone abzielen, die für die ZCCHC6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZCCHC6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZCCHC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZCCHC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZCCHC6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZCCHC6 HDR-Plasmid (h) und ZCCHC6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZCCHC6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZCCHC6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.