ZBP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-425482-NIC

Il gene murino **Zbp1** codifica ZBP1 (nota anche come DAI), un sensore citosolico di acidi nucleici che si lega agli acidi nucleici in conformazione Z e funge da adattatore dell’immunità innata. In seguito al rilevamento di acidi nucleici virali o endogeni, ZBP1 recluta RIPK3 e altri nodi di segnalazione per promuovere programmi genici stimolati dall’interferone e risposte infiammatorie, e può anche collegarsi a vie di morte cellulare regolata, inclusa la necroptosi. Attraverso il crosstalk con la segnalazione dell’interferone di tipo I, l’attivazione di NF-κB e i processi associati all’inflammasoma, ZBP1 contribuisce a modulare la restrizione antivirale e il tono infiammatorio dei tessuti. Una segnalazione deregolata di ZBP1 è stata implicata in infiammazione eccessiva e immunopatologia durante le infezioni e in modelli di malattie infiammatorie e neuroimmuni, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici sull’immunità innata.

ZBP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Zbp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Zbp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Zbp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Zbp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.