ZADH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408358

Panoramica

ZADH2 (proteina 2 contenente un dominio alcol deidrogenasi legante lo zinco) codifica una putativa ossidoreduttasi che presenta un motivo di legame allo zinco simile a quello delle alcol deidrogenasi, suggerendo un ruolo nella chimica redox cellulare e nel metabolismo. Come membro di un più ampio panorama di deidrogenasi/riduttasi, ci si attende che ZADH2 influenzi processi enzimatici dipendenti da cofattori che si intersecano con il metabolismo dei lipidi e degli aldeidi, le risposte allo stress ossidativo e l’omeostasi metabolica mitocondriale o citosolica. Le variazioni nell’attività degli enzimi redox e metabolici sono spesso associate ad alterazioni di proliferazione, differenziamento e adattamento allo stress nei tessuti umani, rendendo ZADH2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul rimodellamento metabolico e sul controllo dello stato cellulare. Le ricerche in corso sull’espressione e sulla funzione di ZADH2 in diversi contesti tissutali ne supportano l’impiego in studi focalizzati su vie di segnalazione, più che in un singolo modello specifico di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZADH2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZADH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZADH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZADH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZADH2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZADH2 per lo studio della segnalazione di ZADH2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZADH2 critici per la funzione di ZADH2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZADH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZADH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZADH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZADH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZADH2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZADH2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZADH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZADH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.