YY1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400395-ACT

YY1（Yin Yang 1）は、広く発現している亜鉛フィンガー型転写因子で、状況に応じた遺伝子発現プログラムを統合するために、転写活性化因子としても転写抑制因子としても機能します。ポリコーム群複合体、ヒストン修飾酵素、コアプロモーター要素と相互作用することでクロマチン構造やRNAポリメラーゼIIによる転写を制御し、細胞周期の進行、DNA損傷応答、分化、代謝適応などの過程に影響を与えます。さらにYY1は、エンハンサー—プロモーター間ループ形成や系譜特異的な転写ネットワークの制御にも関与するとされ、エピジェネティック制御、Wnt/β-カテニンシグナル伝達、ストレス応答性転写などの経路との関連が示されています。YY1活性の破綻や結合様式（バインディング・ランドスケープ）の変化は、がん原性の転写状態、免疫・炎症シグナルの変化、神経発達に関わる表現型と関連づけられており、転写制御機構の解析研究で広く用いられる重要因子となっています。

YY1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性YY1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

YY1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における YY1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はYY1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性YY1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のYY1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるYY1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびYY1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるYY1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。