YME1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424248

Übersicht

Yme1l1 kodiert YME1L1, eine ATP-abhängige i-AAA-Metalloprotease, die in der inneren Mitochondrienmembran verankert ist und Qualitätskontrolle ausübt, indem sie fehlgefaltete oder geschädigte Proteine abbaut und zentrale Regulatoren der mitochondrialen Dynamik prozessiert. Durch die Kontrolle des Umsatzes von Substraten, die an der OPA1-abhängigen Fusion der inneren Membran, der Integrität der Atmungskette und der Proteostase beteiligt sind, trägt YME1L1 zur Aufrechterhaltung der Crista-Architektur und der mitochondrialen bioenergetischen Funktion bei. Der Verlust oder eine Fehlregulation von YME1L1 stört die Mitophagie, verstärkt die mitochondriale Stresssignalgebung und kann Fragmentierung, veränderte oxidative Phosphorylierung sowie eine erhöhte Anfälligkeit für Apoptose fördern. Diese Prozesse sind in Modellen der Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion und anderer Erkrankungen, die mit einer beeinträchtigten mitochondrialen Homöostase verbunden sind, breit relevant.

Das YME1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Yme1l1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Yme1l1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Yme1l1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die YME1L1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Yme1l1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der YME1L1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Yme1l1-Exone abzielen, die für die YME1L1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Yme1l1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom YME1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom YME1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Yme1l1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das YME1L1 HDR-Plasmid (m) und YME1L1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Yme1l1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Yme1l1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.