YME1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424248

Panoramica

Yme1l1 codifica YME1L1, una metalloproteasi i-AAA ATP-dipendente incorporata nella membrana interna mitocondriale, che svolge un controllo di qualità degradando proteine ripiegate in modo errato o danneggiate e processando regolatori chiave della dinamica mitocondriale. Controllando il turnover di substrati coinvolti nella fusione della membrana interna dipendente da OPA1, nell’integrità della catena respiratoria e nella proteostasi, YME1L1 contribuisce a mantenere l’architettura delle creste e la funzione bioenergetica mitocondriale. La perdita o la disregolazione di YME1L1 altera la mitofagia, aumenta la segnalazione di stress mitocondriale e può favorire frammentazione, fosforilazione ossidativa alterata e maggiore suscettibilità all’apoptosi. Questi processi sono ampiamente rilevanti in modelli di neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica e altri disturbi legati a un’omeostasi mitocondriale compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Yme1l1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Yme1l1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Yme1l1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina YME1L1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Yme1l1 per lo studio della segnalazione di YME1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Yme1l1 critici per la funzione di YME1L1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Yme1l1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal YME1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal YME1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Yme1l1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal YME1L1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR YME1L1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Yme1l1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Yme1l1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.