YME1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409793

Panoramica

YME1L1 codifica una metalloproteasi mitocondriale i-AAA ATP-dipendente localizzata nella membrana interna, dove svolge il controllo qualità delle proteine di membrana e contribuisce a mantenere l’integrità della catena respiratoria. Accoppiando l’idrolisi dell’ATP alla proteolisi, YME1L1 regola la proteostasi mitocondriale, la morfologia dell’organello e l’adattamento allo stress, inclusa la rimozione di componenti ripiegati in modo errato o danneggiati nel dominio rivolto verso lo spazio intermembrana. Contribuisce alla dinamica mitocondriale attraverso la processazione di fattori che influenzano l’architettura delle creste e l’equilibrio tra fissione e fusione, collegando la sua attività all’omeostasi bioenergetica e alla gestione delle specie reattive dell’ossigeno. Alterazioni della funzione di YME1L1 sono state associate, in studi genetici, a fenotipi di disfunzione mitocondriale e a meccanismi di malattie neuroevolutive o neuromuscolari, rendendolo rilevante per la modellizzazione di difetti del controllo qualità mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene YME1L1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del YME1L1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto YME1L1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina YME1L1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di YME1L1 per lo studio della segnalazione di YME1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni YME1L1 critici per la funzione di YME1L1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di YME1L1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal YME1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal YME1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus YME1L1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal YME1L1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR YME1L1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia YME1L1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio YME1L1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.