Y14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403255-ACT

RBM8Aは、スプライシング後にmRNA上に付加され、下流のRNA代謝を統括するエクソン接合複合体（EJC）の中核構成因子であるヒトRNA結合タンパク質Y14をコードします。Y14は、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）、mRNAの核外輸送、翻訳制御に関与し、転写産物の品質管理と遺伝子発現恒常性に影響を及ぼします。これらの機能を通じて、RBM8Aは細胞周期の進行、発生に関わる遺伝子制御、ストレス応答性のRNAプロセシングに関連する経路に影響します。EJC活性やRBM8Aに関連するRNA監視機構の破綻は、神経発生やがんに関連する遺伝子発現プログラムを含む複数の疾患関連状況で観察される、異常スプライシングや転写産物の安定性変化と結び付けられています。

Y14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBM8Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Y14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBM8A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBM8A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Y14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBM8A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるY14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBM8A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるY14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。