Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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XPF Plasmide Double Nickase (h): sc-401692-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- XPF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il XPF Double Nickase Plasmid (h) e il XPF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERCC4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: XPF Antibody (F-11): sc-398032
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
XPF Plasmide Double Nickase (h) | sc-401692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
XPF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC4 codifica per l’endonucleasi XPF specifica per strutture, che forma un eterodimero con ERCC1 per catalizzare incisioni 5′ in corrispondenza di lesioni del DNA e di intermedi di DNA ramificati. Questo complesso è essenziale per la riparazione per escissione di nucleotidi (NER) di adotti voluminosi, partecipa alla riparazione dei crosslink interfilamento all’interno della rete dell’anemia di Fanconi e contribuisce al processamento delle forcelle di replicazione bloccate. L’attività di XPF aiuta a mantenere la stabilità del genoma coordinando il riconoscimento della lesione, l’incisione e le fasi successive di sintesi durante la riparazione. Difetti della funzione di ERCC4 sono collegati a risposte al danno del DNA compromesse e sono associati a sensibilità ai raggi UV e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e per disordini ereditari della riparazione del DNA.
XPF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERCC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERCC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERCC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERCC4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.